大家好,感谢邀请,今天来为大家分享一下大肠杆菌质粒的问题,以及和什么是大肠杆菌质粒载体的一些困惑,大家要是还不太明白的话,也没有关系,因为接下来将为大家分享,希望可以帮助到大家,解决大家的问题,下面就开始吧!
大肠杆菌都有质粒吗
一般的话,存在自然界的大肠杆菌自身都带有质粒,质粒编码非细菌生命所必须的某些生物学性状,如性菌毛、细菌素、毒素和耐药性等。质粒具有可自主复制、传给子代、也可丢失及在细菌之间转移等特性,与细菌的遗传变异有关。但是大肠杆菌工程菌自身不带质粒。大肠杆菌中存在质粒不一定都具有抗性基因,但有抗性的大肠杆菌一般都与其具有质粒有关。
什么是大肠杆菌质粒载体
大肠杆菌质粒载体是应用最广泛的克隆载体,含有大肠杆菌源质粒的复制起始位点,能够在转化的大肠杆菌中按质粒复制的形式进行复制。pBR322是一种常用的典型质粒载体。pBR322由大肠杆菌源质粒emphasis:role=italicColemphasis:E1衍生的质粒pMB1作为出发质粒构建而成,含有emphasis:role=italicColemphasis:E1复制起始位点(Col-ori),能在大肠杆菌细胞中高拷贝复制。
pBR322具有四环素抗性基因(emphasis:role=italictetsuperscriptrsuperscriptemphasis)和氨苄青霉素抗性基因(emphasis:role=italicampsuperscriptrsuperscriptemphasis)两种抗性,作为筛选转化子的选择标记基因。在emphasis:role=italicampsuperscriptrsuperscriptemphasis基因区有限制性内切核酸酶emphasis:role=italicPstemphasisI、emphasis:role=italicScaemphasisI和emphasis:role=italicPvuemphasisI的识别序列,在emphasis:role=italictetsuperscriptrsuperscriptemphasis基因区有限制性内切核酸酶emphasis:role=italicBamemphasisHI、emphasis:role=italicSalemphasisI、emphasis:role=italicEcoemphasisRⅤ的识别序列,以及在emphasis:role=italictetsuperscriptrsuperscriptemphasis基因的启动调控区有emphasis:role=italicClaemphasisI和emphasis:role=italicHinemphasisdⅢ的识别序列。
并且这些限制性内切核酸酶在此质粒载体上只有一个识别序列,因此均可作为克隆外源DNA片段的克隆位点。pBB322分子大小为4363bp,虽然不是很小,但足以克隆10kb以下的外源DNA片段。此质粒载体主要用于基因克隆,此外也常常作为构建新克隆载体的骨架,或取其基本元件。为了便于外源DNA片段的克隆,在载体合适的位置组装一个多克隆位点(MCS)连杆,如常用的质粒载体pUC18和pUC19(link:xlinkhref=i010502图4-4link)。pUC18和pUC19两者的差别只是多克隆位点上各种克隆位点的走向相反。
设计这样一对质粒载体,便于用两种限制性内切核酸酶酶切产生的一个DNA片段以正、反两个方向组入载体,保证DNA片段中基因的信息链与质粒载体信息链连接,进行有效的表达。
如何把质粒转入大肠杆菌中
用感受态的细胞法。即用Ca2+处理,使大肠杆菌处于感受态很容易吸收周围的DNA,再将大肠杆菌与质粒混合培养,就转人。
关于大肠杆菌质粒和什么是大肠杆菌质粒载体的介绍到此就结束了,不知道你从中找到你需要的信息了吗 ?如果你还想了解更多这方面的信息,记得收藏关注本站。